[必威登录]荧光原位杂交技术&临床价值

    发布时间:2017-09-26 10:05:57作者:必威来源:本站
     随着社会信息化的发展,人们生活节奏不断加快,当发现自身健康出现异常信号时,都会异常紧张与担忧,因此作为医务工作者,不仅要能够做出正确的疾病诊断和疾病治疗,还要尽可能缩短诊断的时间,缓解患者紧张的心情,为疾病的治疗做出充分的准备,荧光原位杂交技术以其快速、准确的特点广泛应用于临床实践。

        【技术原理】

        荧光原位杂交(英文简称FISH),是一项在体外直接观察细胞中特定核酸的技术。其主要原理:根据碱基互补配对原则,将特定的DNA序列与细胞内的目标序列互补结合,探针带有荧光,在合适的激发光照射下,杂交探针与目标DNA能够在荧光显微镜下被清楚的观察到。该技术在临床应用中具有快速、准确的特点,并且操作相对简单。操作示意图如下:

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        【临床价值】

        一、FISH应用于Her-2基因检测

        酪氨酸激酶-人类表皮生长因子受体2(Her-2)在20%-30%乳腺癌患者中有基因的扩增和蛋白的过度表达。临床研究表明,Her-2阳性的乳腺癌浸润性强、无病生存期短、预后差,针对这部分病人,使用曲妥珠单抗(赫赛汀)治疗有效。目前通常使用的免疫组织化学方法无法区分Her-2中度阳性的患者是否存在Her-2基因的扩增,直接检测Her-2基因扩增水平的荧光原位杂交技术被认为检测乳腺癌Her-2基因扩增的的“金标准”。

        二、FISH应用于ALK基因断裂检测

        间变性淋巴瘤激酶(ALK)属于胰岛素受体超家族,能与多种基因发生融合,在人类的多种恶性肿瘤中发现,如非小细胞肺癌,ALK重排导致ALK基因的异常激活,进而通过激活下游信号通路导致细胞增殖和生成,促进肿瘤生长。ALK融合基因首次发现于2007年,研究表明ALK融合基因突变可诱导肺癌的发生,给予ALK酪氨酸激酶抑制剂肿瘤可迅速消退,现已有相关药物批准上市用于治疗ALK阳性的NSCLC患者。

        三、FISH在产前诊断中的应用

        1992年,Klinger首次前瞻性的使用FISH,将诊断时间缩短为24-48小时,并且美国医学遗传学会(ACMG)、加拿大妇产科医生协会(SOGC)指南中明确指出FISH具有与金标准几乎相同的灵敏性和特异性,无需参考传统的细胞遗传学检测结果,单独检测结果同样可信。

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        FISH应用于产前诊断领域主要针对13\18\21\X\Y五条染色体数目异常进行分析。五条染色体异常占所有染色体异常的70%;占新生儿有意义的染色体异常的85-90%;FISH技术针对这五条染色体数目异常快速检测;与核型分析互为质控作为产前诊断的双保险;弥补核型分析实验失败无结果的问题,争取最佳治疗时间。FISH检测主要适应人群适用人群:唐氏筛查高危人群;超声检测发现与染色体相关的标记或畸形;孕妇年龄大于35岁;曾有遗传病家族史或携带者;曾有原因不明的流产史、畸形史、死胎;有明显的致畸因素及接触史等。FISH在诊断产前染色体数目异常方面具有重要意义。尤其在唐氏筛查高风险,孕妇精神高度紧张的情况下,FISH检测能使孕妇在很短的时间内得到相关染色体的结果。另外,FISH在流产组织的检测中同样具有重要意义,对部分流产组织进行检测发现,一部分存在染色体数目的异常,如16-三体、22-三体、16-单体、22-单体等等。

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        【注意事项】

        1.羊水标本要注意:在羊水穿刺时,是否有母血的污染。

        2.石蜡切片标本要注意:胃蛋白酶消化时间,时间不宜过短,防止细胞间质消化不彻底。

        3.肺部穿刺标本要注意:由于穿刺液通常较少,操作要更加谨慎。

        4.注意变性温度和杂交温度,并且加探针及以后操作环节要避光,加探针后要密封好。

        5.在荧光显微镜下阅片时,要注意杂点信号的干扰,严格按标准计数。

        总之,荧光原位杂交技术在临床上具有重要的应用价值,在疾病诊断及病情判断方面显示了极大的优势。
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